Принцип рада Пастерове пипете је првенствено заснован на гравитационо-покренутом протоку и капиларном деловању, у комбинацији са ручном контролом разлика ваздушног притиска да би се олакшала аспирација и пренос течности.
Ручна контрола усисавања: Оператер примењује усисавање на широки крај пипете-било орално или помоћу помоћне гумене крушке-да би створио негативан притисак унутар цеви, чиме увлачи течност у фини врх.
Гравитационо{0}}Дозирање: Када се усисавање ослободи, течност природно истиче под утицајем гравитације; дозирање се такође може помоћи благим стискањем тела пипете или нагињањем посуде за пријем.
Поновљивост капљица: Калибрацијом односа „капи по милилитру“, пипета омогућава приближан квантитативни пренос, што је чини погодном за процедуре које захтевају поновљивост, а не апсолутну прецизност.
Осигурање стерилности: Пре употребе, памучни чеп се може уметнути у широки крај и стерилисати да би се спречила микробна контаминација током руковања{0}}што је пракса посебно уобичајена у микробиолошким експериментима.